第99章 内在知觉0 (第2/2页)
低速离心(500-1000xg):沉淀细胞核等大颗粒。
中速离心(10,000xg):分离线粒体、溶酶体。
高速离心(100,000xg):收集微粒体、核糖体。
每次离心后取上清进行下一阶段,逐步分离各组分。
化学沉淀与溶解平衡
离心加速不溶颗粒的沉淀,而溶解平衡描述溶液中溶质浓度与沉淀的动态关系。离心通过外力打破平衡,使溶解度低的物质快速析出。
介质选择:蔗糖或 percoll 梯度可提高分辨率。
温度控制:防止酶降解样本。
离心时间:需优化以避免过度压缩沉淀或分离不全。
匀浆细胞,裂解后获得混合细胞器。
首次离心 1000xg 10 分钟,弃沉淀(细胞核)。
上清以 12,000xg 离心 20 分钟,得线粒体沉淀。
再次以 100,000xg 离心 1 小时,获取微粒体膜。
在差速离心过程中,形状对颗粒沉降速度有显着影响。长形颗粒由于其形状不规则,相较于球形颗粒,在离心力作用下的沉降速度会更慢。因此,在进行差速离心时,需要考虑到这一因素,并对实验结果进行校正,以确保得到准确的亚细胞结构分离。
此外,当某些细胞器的密度相近时,仅依靠差速离心可能无法实现有效分离。在这种情况下,需要结合梯度离心等其他技术,以提高分离的准确性和效率。
通过精确控制离心参数,如离心速度、离心时间、离心半径等,以及深入理解颗粒动力学原理,可以更好地利用差速离心技术,高效地分离复杂生物样品中的亚细胞结构。